设为首页 | 加入收藏
网站首页 机构职能 政策文件 科技服务 本市科技 仪器共享平台
站内搜索:
 
 您当前位置: 鞍山市科学技术局 >> 科技前沿
瑞典制药公司科学家设计出规避CRISPR脱靶效应方案
发布日期:2018年10月11日

瑞典阿斯利康公司的生物学家Marcello Maresca与美国科学家J. K Joung合作,在912日的Nature Letter上发文表示,他们设计出了一种可有效规避CRISPR脱靶效应的方案。在小鼠体内进行的研究表明,利用他们体内非靶点验证VIVO 策略(verification of in vivo off-targets)可以稳定地鉴定出CRISPR在体内全基因组中的脱靶效应。
    作为最受关注的基因编辑“魔剪”,CRISPR技术显示了无限的临床应用潜力,但近两年来多项研究却指出其存在“乱剪”的巨大风险(脱靶效应)。一直以来基于基因比对的脱靶效应预测软件,则不能完全让人放心。
    J. K Joung团队于2017年发明了一种有效检验CRISPR脱靶效应的体外验证方法(Nat. Methods 14, 607614)。他们以小鼠基因组为研究对象,在体外将其DNA剪切成片段,每个片段约包含300个碱基对,然后连接adapters使DNA成环。随后,他们引入一个CRISPR-Cas9和引导RNA复合体,进行切割,使其线性化。最后,加入另一种只剪切闭环DNA的核酸酶用来降解未被切割的环状DNA,体系中就只剩下线性的(即被CRISPR-Cas9切割了的)DNA用于测序,就可以确定哪些位点被CRISPR-Cas9剪切了。
    Marcello Maresca等将这种体外验证方法的结论在小鼠体内试验中进行了验证,发现脱靶效应在体内外是高度吻合的。因此,只需要设计对靶点高度特异性的引导RNA,并利用VIVO进行验证(没有脱靶效应),便可以规避CRISPR脱靶效应。

关闭窗口
鞍山市科学技术局 鞍山市知识产权局主办 版权所有
地址:千山中路280号 邮编:114044 E-mail:asskjj@163.com
电话:0412-5217006 传真:0412-5215803
辽ICP备11007323号 (建议使用1024×768分辨率)